一般實驗室在確定培養基種類后,還會遇到培養基有不同分型的情況。那么對于經典培養基中不同成分的作用及選擇原則又是什么呢?請往下看 ~
1.葡萄糖(Glucose):
作用:細胞生長所需的主要能量來源。
? 如何選擇不同葡萄糖含量的培養基?
最初的 DMEM 中,葡萄糖濃度為 1 g/L,現在稱其為低糖型 DMEM,適合培養多數哺乳動物細胞;
高糖型 DMEM 中的葡萄糖濃度為 4.5 g/L,適合生長速度快,附著性較差的腫瘤細胞;
使用無糖培養基的主要目的是,通過控制細胞的能量來源,研究細胞的代謝過程或葡萄糖利用效率
2.HEPES:
作用:pH 緩沖劑。
是一種氫離子緩沖劑,其作用不依賴于 CO2;
在一定范圍內對細胞無毒性作用,能較長時間控制恒定的 pH 范圍,保證細胞良好生長;
部分細胞對酸堿度的變化非常敏感,建議使用 HEPES;
根據需要,非必需。
3.L-谷氨酰胺(L-glutamine):
作用:L-谷氨酰胺是一種氨基酸,細胞的重要能量來源,參與蛋白質的合成,也為合成核酸提供碳源。
? 存在的不足:
L-谷氨酰胺不穩定,在中性的水溶液中會自發降解;
降解產物氨對細胞有毒性;
對氨敏感的細胞(如干細胞和原代細胞等)或培養環境(高密度反應器,無補料的長期培養)不推薦含 L-谷氨酰胺的培養基。
? 解決方案:
選擇不含谷氨酰胺的培養基,在使用前再添加 L-谷氨酰胺,并盡快用完;
選擇穩定的谷氨酰胺替代物,如 glutaGRO。
4.酚紅(Phenol red):
作用:pH 值的指示劑(中性時為紅色,酸性時為黃色,堿性時為紫色)。
? 何時選擇不含酚紅的培養基?
培養干細胞或細胞克隆時傾向于不加酚紅;
酚紅可以模擬固醇類激素的作用(特別是雌激素);
酚紅的顏色會干擾流式檢測,不建議使用含酚紅的培養基制備細胞樣品(通常用 PBS)。
5.碳酸氫鈉(Sodium bicarbonate):
作用:pH 緩沖劑。
pH 6.8~7.8 為細胞生長的最佳 pH 條件;
多數培養基利用碳酸氫鈉進行緩沖;
碳酸氫鈉的緩沖需要 CO2;
1.高碳酸氫鈉(1.5~3.7 g/L)需要 5~10% CO2 培養;
2.低碳酸氫鈉(0.35 g/L)不需要 CO2 培養。
干粉培養基在配制時需要單獨添加。
6.丙酮酸鈉(Sodium pyruvate):
作用:能量來源。
丙酮酸鈉可以作為細胞培養中的替代碳源;
葡萄糖不足的時候,細胞可以代謝丙酮酸鈉;
保證細胞更好地生長;
根據需要,非必需組分。